Molekularna dijagnostika: PCR u realnom vremenu
Trenutno, u molekularnoj dijagnosticiRazvijen je mehanizam lančane reakcije polimeraze (PCR), koji je postao poticaj za razvoj velikog broja dijagnostičkih metoda za bolesti zasnovane na definiciji genetskog materijala. Za PCR u stvarnom vremenu koristi se fragment gena (naročito nukleinske kiseline) uzročnika ove bolesti, koji se ne nalazi u drugim pojedincima.
Načelo PCR je množenjespecifičan fragment DNA od patogena je milijun puta korištenjem DNA polimeraze u posebnoj jedinici tekstu termalni ciklički uređaj, koji daje ciklički ponavljanje temperaturnog režima za određeni program.
Dijagnoza PCR-a omogućava ponavljanje serijepojačanje, očuvanje aktivnosti enzima. Kada je pojačanje odvija glatko, u jednom ciklusu broj primjeraka određeni dio DNK patogena parovima, nakon trideset ciklusa - sto i deset godina. Zbog toga se PCR upotrebljava u dijagnostici kako bi se identificirali dovoljno male patogene, čije otkrivanje je nemoguće bez toga.
Treba napomenuti da RNA ne može biti matricaza PCR u realnom vremenu. Stoga, da bi se detektirala virusna RNA, potrebno je dobiti DNA koja odgovara njegovom fragmentu, prije amplifikacije. Lančana reakcija polimeraze omogućava mjerenje DNA i RNA patogena. Ovako dobivene informacije služe za praćenje učinkovitosti korištene terapije, kao i za procjenu kliničke prognoze.
Osim toga, PCR u realnom vremenu ne trebadodatne akcije koje se odnose na dešifriranje DNA ili amplikona koji se proučavaju, koji služe kao prepreka pravilnoj dijagnozi i dovode do lažnih rezultata. Ovaj pristup nam omogućuje da ne koristimo fazu elektroforeze koja dovodi do smanjenja rizika od infekcije proizvodima lančane reakcije polimeraze. Također, u svezi sa smanjenjem broja manipulacija s patogenim, vrijeme studije se smanjuje, njegov proces je pojednostavljen, a vjerojatnost pogrešaka je smanjena. PCR također omogućuje određivanje početnog broja DNA kopija patogena u kliničkom ispitivanju, što pomaže u identificiranju razdoblja pogoršanja bolesti i poduzimanje pravovremenih mjera za liječenje pacijenta.
Do danas je veliki brojmetode popravljanja amplifikacije u realnom vremenu. Najčešće se koriste različite tehnike koje koriste radiokemijske korelirane sonde, čiji intenzitet zračenja varira s akumulacijom amplika, a realno se bilježi pomoću posebnog uređaja nazvanog pojačalo s optičkim modulom. To osigurava visoku razinu osjetljivosti analize. U ovom slučaju, PCR proizvod se može otkriti zajedno s velikom količinom nusproizvoda, dok se kod uporabe elektroforeze često ne primjećuje.
U realnom vremenu PCR,pozitivnih, kontrolnih i negativnih uzoraka. Dakle, pozitivni i negativni uzorci tijekom studije analizirani su kao zasebni uzorci, tada se kontrolni uzorak dodaje svakom takvom uzorku i prolazi kroz sve faze analize.
Do danas je veliki brojuređaji za lančanu reakciju polimeraze. To uključuje Bio-Rad, Applied Biosystems, Cepheid ili Roche. Svaki od njih ima zasluge i demere
Treba napomenuti da je PCR dijagnostička metoda,Koristi se u velikim znanstvenim, istraživačkim i dijagnostičkim centrima širom svijeta, jer omogućuje trenutačnu interpretaciju rezultata.
